*培養基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巰基乙醇(GIBCO 21985); 1 000 U/ml白血病抑制因子(CHEMICON ESG1107)
凍存液: 90%胎牛血清或*培養液; 10%二甲基亞砜(DMSO, Sigma D2650)
一 小鼠胚胎干細胞復蘇
1. 操作前把培養液在37 ℃水浴中溫熱。
2. 從液氮中取出一支凍存管的小鼠胚胎干細胞, 放入37 ℃水浴中晃動, 直到只剩下小冰晶。
3. 吸取凍存管內的細胞懸液加至有少量*培養液的15 ml 離心管中, 1 000 r/min 離心5 min。
4. 吸棄上清液, 加4~6 ml 培養液, 吹打懸浮。
5. 重復吹打, 制成單細胞懸液, 盡量避免氣泡。
6. 轉移到1個已經鋪好飼養層的25 cm2培養瓶中培養。
7. 每天換液。
